嬰兒睡眠技巧描述：：醫藥魔方： 10月19日，Incyte公布蘆可替尼乳膏（Opzelura）1.5%用于治療12歲及以上的非節段性白癜風患者的關鍵III期TRuE-V試驗的最新數據。結果顯示，相比于此前公布的治療24周的數據，經蘆可替尼治療52周后，面部和全身色素復色的白癜風患者比例更高。 2022年7月19日，FDA批準蘆可替尼（Ruxolitinib）乳膏1.5%用于成人和12歲以上兒童患者非節段性白癜風的局部治療。這是首個獲FDA批準的白癜風療法，也是首個且唯一一個獲批的局部外用JAK抑制劑。（詳見：里程碑！外用JAK抑制劑獲FDA批準治療白癜風） 此前，TRuE-V研究蘆可替尼治療24周的數據已公布，最新52周的數據于近期發表在《新英格蘭醫學雜志》，研究結果表明： TRuE-V研究主要終點及關鍵次要終點數據（來源：NEJM） 在治療第24周時，蘆可替尼治療組有近30%患者面部白癜風嚴重指數相對基線改善≥75%（F-VASI75）；在治療第52周時，蘆可替尼治療組有近50%的患者達到F-VASI75。 在治療第24周時，蘆可替尼治療組有近15%患者面部白癜風嚴重指數相對基線改善≥90%（F-VASI90）；在治療第52周時，蘆可替尼治療組有近30%的患者達到F-VASI90，相較于治療24周整整翻了一倍。 此外，在治療第52周時，總體白癜風面積嚴重程度指數相對基線改善≥50%(T-VASI50)患者的占比也增加；安全性方面，最常見的不良反應（發生率≥1%）是應用部位痤瘡、應用部位瘙癢、鼻咽炎、頭痛、尿路感染、應用部位紅斑和發熱。 Incyte炎癥和自身免疫部門副總裁Jim Lee博士表示：“Incyte致力于為患有免疫性皮膚病的患者開發創新藥物，基于此前沒有批準的白癜風療法，TRuE-V研究結果在《新英格蘭醫學雜志》上的發表將多年來的白癜風研究工作推向了高潮。關鍵研究TRuE-V的結果表明，蘆可替尼乳膏治療使患者面部和全身白癜風都得到了顯著改善。我們感到自豪的是，這些數據是此前蘆可替尼乳膏獲批上市的基礎，蘆可替尼乳膏是FDA批準的首款也是唯一一款用于非節段性白癜風的治療方法。” 推薦閱讀：白癜風藥物研究進展 參考文獻： DOI：10.1056/NEJMoa2118828 （網頁鏈接） #白癜風#因塞特醫療(INCY) 杰森Lu： 高盛推薦的三只醫藥股拜瑪林制藥(BMRN) Horizon Therapeutics(HZNP) 因塞特醫療(INCY) #研究報告# 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 4 Statement of changes in beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-062808  Size: 17 KB 網頁鏈接 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 8-K Current report, item 5.02 Accession Number: 0001104659-22-105577  Act: 34  Size: 197 KB 網頁鏈接 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 4 Statement of changes in beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-052801  Size: 7 KB 網頁鏈接 藥智網： 創造37億骨髓纖維化治療藥物，Incyte 的JAK激酶抑制劑專利布局牛在哪里？ 來源：藥智網/Williamxiang Incyte（因賽特）公司磷酸蘆可替尼片是全球首個上市的JAK抑制劑產品，2011年11月獲FDA批準用于治療骨髓纖維化；2021年9月獲FDA批準的磷酸蘆可替尼乳膏是首個獲準用于治療特應性皮炎的外用JAK抑制劑。 據藥智數據，2022年7月14日CDE受理了正大天晴遞交的磷酸蘆可替尼片上市申請，成為首家報產該37億骨髓纖維化治療藥物品種的本土藥企。 FDA于2018年5月批準因塞特公司與禮來公司合作開發的巴瑞替尼片劑用于治療類風濕性關節炎，對托伐替布構成競爭。與托伐替布對JAK3抑制活性最高形成反差，巴瑞替尼對JAK3的抑制活性最低。 前文，我們對輝瑞公司JAK激酶抑制劑專利布局進行了詳細分析。與輝瑞相比，Incyte（因賽特）公司的JAK激酶抑制劑化合物專利布局主要圍繞JAK1與/或JAK2開展研究，而且靶點更加精細化、結構母核更加多元化值得借鑒。 意外的是，因賽特沒有就JAK激酶抑制劑晶型申請相關專利。不過雖然未就晶型專利進行布局，但磷酸蘆可替尼專利的授權為新鹽型專利布局的策略也值得借鑒。請看下文。 化合物專利整體分析 注： a 專利公開號/公告號納入優先順序為：CN……B/C(授權公告)>CN……A（申請公開）>US……BX>EP……BX>US……AX>EP……BX>其他，嚴格意義上講，僅有申請公開者應當被稱為“專利申請”，本文統稱為“專利”。 b, d 摘自從屬權利要求的優選化合物如下表所示： c 僅有定性的抑制活性描述，而無定量數據 e 蘆可替尼的化合物專利 f 僅以分段數值范圍的形式披露了化合物對酶的IC50值，此處所列為最低范圍，且多于5個化合物符合這一標準 g 披露抑制活性的化合物≤5個 從上表不難發現，Incyte公司的JAK激酶抑制劑化合物專利布局存在以下特點： 1.主要圍繞JAK1與/或JAK2開展研究 雖然US8871753B2、US8765727B2涉及JAK3與TYK2的相關抑制活性數據，但前者僅披露了部分化合物對此兩種酶的抑制活性，而后者披露的化合物對JAK3與/或TYK2的選擇性不及JAK1、JAK2。此外，上述兩件專利均未在中國，且無化合物進一步開發的報道。 2.靶點精細化 因賽特公司在2020年申請了多件JAK2 V617F抑制劑化合物專利。Pubmed數據庫中檢索到的關于JAK2 V617F的文獻最早發表于2005年，并指出該突變是與骨髓增生疾病相關的重要分子事件。因賽特公司對這一突變的深度開發與其蘆可替尼最早獲批的適應證（骨髓纖維化）一脈相承。 3.結構母核多元化 由于因賽特公司的JAK激酶抑制劑化合物專利數量多于輝瑞公司，而且主要圍繞JAK2展開，因此前者的結構母核更加豐富，除了輝瑞公司應用最多的以吡咯并嘧啶為代表的五元環稠合六元環母核，因賽特公司對稠合三環、稠合四環、大環、單環母核的開發成為該公司JAK激酶抑制劑專利布局的一大特色。 4.技術效果撰寫方式值得斟酌 因賽特公司大部分專利均以數值范圍的形式披露相關化合物對各酶的IC50，筆者認為這種撰寫方式最大的弊端在于難以與審查員指定的現有技術進行直觀的比較，從而為創造性審查意見的答復埋下隱患。 單個化合物專利優選實施例分析 US8513270B2以數值范圍的形式披露了77個化合物對HTS-JAK2-HTRF-2、JAK2-INA61、JAK2-JAK1-HTRF2、JAK2-JAK3-HTRF2與JAK2-TF1-BC RABL1中至少三個靶點的IC50值，隨機節選的對四個靶點的IC50值均≤500nM（最低范圍）的化合物如下所示。 CN101932582B聲稱蘆可替尼及其磷酸鹽對JAK1~JAK3中任意一種激酶的IC50值均<50nM。 CN101815717B披露了4種化合物對JAK1~3的IC50，結果如下表所示。 CN101910152B以數值范圍的形式披露了340余個化合物對JAK2的IC50值，均<100nM，任意節選的化合物如下所示。 CN102026999B為巴瑞替尼的化合物專利，其聲稱包括巴瑞替尼在內的62種化合物對JAK1~JAK3中的至少一種酶的IC50值<60nM，其中，僅巴瑞替尼相關技術方案獲授權。產品說明書指出，巴瑞替尼對JAK1、JAK2與TYK2的抑制活性顯著高于其對JAK3的抑制活性。 US8871753B2共披露了近280個化合物對包括JAK1與JAK2在內的至少兩種激酶的IC50值，還披露了多個化合物對ALK的抑制活性，綜合考慮對JAK1的抑制活性與選擇性的5個優選化合物如下所示。 US8765727B2披露了19個化合物對JAK1~3以及TYK2與ALK的抑制活性，綜合考慮對JAK2的抑制活性與選擇性的5個優選化合物如下所示。 CN106967070A披露了2個化合物的異構體對JAK1與JAK2的抑制活性，結果如下表所示。 CN102458581B披露了近200種化合物對JAK1的IC50（數值范圍形式，大部分IC50≤50nM），以及IC50(JAK2)/IC50(JAK1)的比值（R），綜合對JAK1的抑制活性與選擇性最優選的5個化合物如下所示。 US9249145B2以數值范圍的形式披露了近200種化合物對JAK1與JAK2的抑制活性，對兩種酶的IC50均<10nM的示例化合物如下所示。 CN102844317B僅披露了3個化合物對JAK1（IC50值均<2nM）與JAK2（IC50均<1nM）的抑制活性，所述3個化合物的結構式如下所示。 CN102985417B披露了近400個化合物對JAK1、JAK2的抑制活性，以及IC50(JAK2)/IC50(JAK1)的比值（R），綜合考慮對JAK1的活性與選擇性，最優的5個化合物如下所示。 US9034884B2以數值范圍的形式披露了了30余個化合物對JAK1與JAK2的IC50，綜合考慮對JAK1的抑制活性與選擇性優選的5個化合物包括但不限于如下表所示。 實施例3、21、26、27的IC50(JAK1)<5nM，IC50(JAK2)>100nM；實施例2的IC50(JAK1)<5nM，IC50(JAK2)在25~100nM之間。 US10640506B2以數值范圍的形式披露了>170個化合物對JAK1與JAK2的IC50，綜合考慮對JAK1的活性與選擇性而優選的5個化合物（IC50(JAK1)<5nM，IC50(JAK2)>100nM）包括但不限于： CN103797010B以數值范圍的形式披露了40余個化合物對JAK1與JAK2的IC50以及IC50(JAK2)/IC50(JAK1)比值，所有化合物的IC50(JAK1)均≤10nM，R值均>10。隨機從從屬權利要求中節選的5個化合物如下所示。 US9359358B2以數值范圍的形式披露了100個化合物對JAK1的IC50（大部分<10nM）與IC50(JAK2)/IC50(JAK1)比值（R，均≥10），隨機節選的5個IC50(JAK1)<10nM的化合物如下所示。 US9193733B2以數值范圍的形式披露了50個化合物對JAK1與JAK2的IC50與IC50(JAK2)/IC50(JAK1)比值（R），其中所有化合物的IC50(JAK1)均<20nM，且R值均≥10，故從從屬權利要求中隨機節選的5個化合物如下所示。 CN104918945B以數值范圍的形式披露了約100種化合物對JAK1與JAK2的IC50以及IC50(JAK2)/IC50(JAK1)比值（R）。隨機節選的5個IC50(JAK1)≤100nM且R>10的化合物如下所示。 CN105452239B以數值范圍的形式披露了17個化合物對JAK1與JAK2的IC50以及IC50(JAK2)/IC50(JAK1)比值（R，均>10），隨機節選的5個IC50(JAK1)≤300nM的化合物如下所示。 US2021395251A1以數值范圍的形式披露了24個化合物對JAK2 V617F等JAK2變體的IC50，其中，IC50(JAK2 V617F)≤100nM的所有三個化合物結構式如下所示。 另隨機節選的2個IC50(JAK2 V617F)>100nM且≤500nM的化合物如下所示。 US2021395257A1以數值范圍的形式披露了6個化合物對JAK2 V617F等JAK2變體的IC50，其中IC50(JAK2 V617F)≤500nM的所有5個化合物結構如下所示。 US2022169649A1以數值范圍的形式披露了112個化合物對JAK2 V617F等JAK2變體的IC50，其中，任意節選的5個IC50(JAK2 V617F)<10nM的化合物結構如下所示。 US2022002299A1以數值范圍的形式披露了42個化合物對JAK2 V617F等JAK2變體的IC50，其中，任意節選的5個IC50(JAK2 V617F)<100nM的化合物結構如下所示。 c 另有其他多個化合物符合這一標準 其他專利 有點意外，筆者未發現因賽特公司就JAK激酶抑制劑晶型申請的相關專利（CN106687462A公開了化合物的晶型特征，但未提出權利要求保護）。但因賽特公司所申請的磷酸蘆可替尼專利在中國等多個國家/地區獲得了授權（中國專利公告號CN101932582B）。 專利審查實踐中，通常會將已公開的化合物專利作為首個申請的新鹽型專利的最接近的現有技術（可參考鹽酸普拉格雷專利無效案）。針對此，蘆可替尼化合物專利的最早公開日期為2007年6月14日（US2007135461A1），而CN101932582B的最早優先權日為2007年6月13日，僅相差一天，化合物專利不能作為評價CN101932582B創造性最接近的現有技術使用。 根據專利布局的一般策略以及相關專利的申請時間，目前可以確認因賽特公司正在對itacitinib進行進一步的開發。Clinicaltrials.gov數據顯示，該化合物已經進入3期臨床試驗階段。 結 語 因塞特公司主要關注JAK1與/或JAK2抑制劑的開發，其中，磷酸蘆可替尼片是全球首個上市的JAK抑制劑產品，于2011年11月獲FDA批準用于治療骨髓纖維化；而于2021年9月獲FDA批準的磷酸蘆可替尼乳膏則是首個獲準用于治療特應性皮炎的外用JAK抑制劑。 FDA于2018年5月批準因塞特公司與禮來公司合作開發的巴瑞替尼片劑用于治療類風濕性關節炎，對托伐替布構成競爭。與托伐替布對JAK3抑制活性最高不同是，巴瑞替尼對JAK3的抑制活性最低。 因塞特公司的JAK激酶抑制劑化合物專利數量多于輝瑞公司，而且母核也比輝瑞更加多元化。雖然未就晶型專利進行布局，但磷酸蘆可替尼專利的授權為新鹽型專利布局的策略值得借鑒。 數據來源：藥智專利通 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 10-Q Quarterly report [Sections 13 or 15(d)] Accession Number: 0000879169-22-000010  Act: 34  Size: 8 MB 網頁鏈接 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 4 Statement of changes in beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-052166  Size: 5 KB 網頁鏈接 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 4 Statement of changes in beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-052164  Size: 5 KB 網頁鏈接 夕陽芳草之白衣懷劍： 信達生物(01801)信達總體強于康方無可爭議 中國創新藥中，最歡喜的就是信達和康方了。近期康方走勢很是強勁，自底部反彈接近兩倍漲幅，信達到今天，僅僅反彈50%左右。但是我認為，就公司品質而言，信達康方各有特點： 1.研發方面，信達總體強于康方，從具體指標看，研發投入、研發人員、管線的廣度深度、重磅產品進度（信達PD-1領先康方）、以及總部位置（個人自創指標，高素質人才只會留在上海等一線城市，不會去廣東的某個三線小城市），信達均強于康方； 2. 康方在雙抗產品領先信達，畢竟是國內第一個雙抗產品，而且在某些癌癥如宮頸癌治療方面，數據看起來很漂亮。但是雙抗產品的實際效用如何？我始終心存疑慮，從一線腫瘤科的醫生朋友得到的反饋并不樂觀，朋友不怎么看好雙抗，導致本人未敢重倉。 3、銷售方面，信達完勝康方。信達銷售隊伍磨練多年，從實戰中脫穎而出，銷售業績逐年上升到今年40-50億元規模，已經拿到未來大藥企的入門票；康方是今年剛剛組建完成銷售隊伍，實戰能力有待證明。 4、商業化（BD）能力，信達完勝康方。看信達的一大堆合作伙伴，禮來、羅氏、因塞特、亞盛、馴鹿等等，引進CART等一大堆熱門產品，自知信達合縱連橫的本事，應在業界數一數二（竊以為，俞博士的最優先事務、也是最擅長的本事就是這個），而康方，合作報道寥寥無幾，更像是一個埋頭苦干的理工男。 5、融資能力及現金存量，信達完勝康方。信達在市場形勢大好之際，大力融資，不久前還從賽諾菲溢價拿到3億歐元，目前家底豐厚，100多億資金，支撐3-5年毫無問題；康方目前現金還是有些緊張，如果銷售不力，支撐1-2年都有問題，前不久被迫低價融資——這也可以看出當家人的眼光和市場判斷力。 信達、康方，是中國創新藥企中光芒閃耀的雙子星，各有千秋也有各自問題，目前價格之下，暫時偏于信達，如果未來康方證明自己優秀，雙抗銷售順利，則有后來居上可能，到時再做考慮 夕陽芳草之白衣懷劍： 今天，在大跌中，默默加了一些信達倉位。 中國創新藥中，最歡喜的就是信達和康方了。近期康方走勢很是強勁，自底部反彈接近兩倍漲幅，信達到今天，僅僅反彈50%左右。但是我認為，就公司品質而言，信達康方各有特點： 1.研發方面，信達總體強于康方，從具體指標看，研發投入、研發人員、管線的廣度深度、重磅產品進度（信達PD-1領先康方）、以及總部位置（個人自創指標，高素質人才只會留在上海等一線城市，不會去廣東的某個三線小城市），信達均強于康方； 2. 康方在雙抗產品領先信達，畢竟是國內第一個雙抗產品，而且在某些癌癥如宮頸癌治療方面，數據看起來很漂亮。但是雙抗產品的實際效用如何？我始終心存疑慮，從一線腫瘤科的醫生朋友得到的反饋并不樂觀，朋友不怎么看好雙抗，導致本人未敢重倉。 3、銷售方面，信達完勝康方。信達銷售隊伍磨練多年，從實戰中脫穎而出，銷售業績逐年上升到今年40-50億元規模，已經拿到未來大藥企的入門票；康方是今年剛剛組建完成銷售隊伍，實戰能力有待證明。 4、商業化（BD）能力，信達完勝康方。看信達的一大堆合作伙伴，禮來、羅氏、因塞特、亞盛、馴鹿等等，引進CART等一大堆熱門產品，自知信達合縱連橫的本事，應在業界數一數二（竊以為，俞博士的最優先事務、也是最擅長的本事就是這個），而康方，合作報道寥寥無幾，更像是一個埋頭苦干的理工男。 5、融資能力及現金存量，信達完勝康方。信達在市場形勢大好之際，大力融資，不久前還從賽諾菲溢價拿到3億歐元，目前家底豐厚，100多億資金，支撐3-5年毫無問題；康方目前現金還是有些緊張，如果銷售不力，支撐1-2年都有問題，前不久被迫低價融資——這也可以看出當家人的眼光和市場判斷力。 信達、康方，是中國創新藥企中光芒閃耀的雙子星，各有千秋也有各自問題，目前價格之下，暫時偏于信達，如果未來康方證明自己優秀，雙抗銷售順利，則有后來居上可能，到時再做考慮。 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 3 Initial statement of beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-052711  Size: 6 KB 網頁鏈接 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 4 Statement of changes in beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-060896  Size: 5 KB 網頁鏈接 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 4 Statement of changes in beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-062319  Size: 5 KB 網頁鏈接 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 4 Statement of changes in beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-054184  Size: 5 KB 網頁鏈接 因塞特醫療(INCY)： 因塞特醫療(INCY) 4 Statement of changes in beneficial ownership of securities Accession Number: 0001209191-22-052206  Size: 24 KB 網頁鏈接 藥時代： 2022年11月8日（北京時間），由復旦大學基礎醫學院王明偉、美國Scripps研究所Peter K. Vogt和中國科學院上海藥物研究所楊德華領銜的合作團隊于《美國國家科學院院刊》（Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, PNAS）在線發表了題為“Cryo-EM structures of cancer-specific helical and kinase domain mutations of PI3Kα”的研究成果。該論文首次報道了人源全長磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）α亞型（p110α-p85α）的三個致癌特異性突變體（H1047R、E542K和E545K）蛋白復合物的冷凍電鏡結構，闡明了突變體誘導PI3Kα產生的局部和整體構象變化，為深入認識PI3Kα突變體致癌分子機制和創制特異性針對突變型PI3Kα的抗癌新藥提供了重要的信息。 磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）是由催化亞基p110α和調節亞基p85α組成的異二聚體，通過介導來自受體酪氨酸激酶的信號來促進細胞生長、增殖和凋亡等1。編碼催化亞基p110α的基因PIK3CA是第二種最常見的致癌基因，為過去20年來藥物發現的最重要靶點之一。其中超過80％的PIK3CA突變聚集在三個位點上：即位于螺旋結構域（Helical domain）的E542K和E545K突變，以及位于激酶結構域（Kinase domain）的H1047R突變，被稱之為“熱點突變”。突變體誘導酶活性增強，促進癌細胞的繁殖與生長2-4。盡管這類激酶的ATP競爭性抑制劑已屢見不鮮，且在其他突變激酶（如表皮生長因子受體）相關腫瘤的治療上取得成功，PI3K抑制劑的臨床開發卻進展緩慢，致使改善攜帶PI3Kα突變體患者的預后成為重大挑戰。傳統抑制劑能同時抑制野生型和突變型PI3Kα的活性，但由于野生型PI3Kα廣泛分布在各類組織器官，其抑制會產生嚴重的毒副作用，突變型PI3Kα特異性抗癌新藥的創制因而成為業界所長期關注的“風口”。雖然在一些未經同行評議的融資文書或會議報告里時有提及，但相關化學結構未見披露，這無疑限制了對這些抑制劑的客觀評估和藥用挖掘。從結構角度來看，目前已報道了突變體H1047R復合物的晶體結構（PDB IDs：3HHM和3HIZ）5，尚無突變體E542K和E545K的相關數據。 參加這項工作的科研人員經過反復優化實驗條件，在PI3Kα小分子抑制劑BYL-719的幫助下，獲得了顆粒均一且性狀穩定的蛋白復合物，應用中國科學院上海藥物研究所300 kV冷凍電鏡拍攝到的清晰圖像和后繼單顆粒三維重構獲得了整體分辨率分別為2.74、2.62和2.77 Å的突變體H1047R、E542K及E545K立體結構。結果顯示，在整體方面，與其野生型的冷凍電鏡結構（PDB IDs：7MYN和7MYO）相比6，突變體H1047R顯示出廣泛的一致性（圖1A），而突變體E542K和E545K則展現出p85α與p110α相互作用被破壞及柔性顯著增加的ABD結構域（圖1B-C）。 圖1. A，突變體H1047R的結構模型（上）以及與野生型結構（PDB ID：7MYO）對比的Cα均方根偏差值（Root mean square deviation, RMSD）示意圖（下）；B，突變體E542K的冷凍電鏡密度圖以及相應的結構模型；C，突變體E545K的結構模型以及相應的局部分辨率示意圖。 突變體H1047R的冷凍電鏡結構與已報道的該突變晶體結構大體一致，但在細節上存在差異。前者的顯著結構特征是R1047側鏈旋轉到一個獨特的、以前未觀察到的位置（圖2A），繼而產生新的氫鍵作用。因此，激活環獲得了更大的靈活性，有利于增強激酶活性。研究還揭示了iSH2和ABD結構域的特異性旋轉（圖2B），這可能削弱ABD與激酶結構域以及iSH2、C2與激酶結構域之間的抑制性接觸，即降低了p85α對p110α活性的自抑制作用（Autoinhibitory action），并可能促進p85與磷酸肽的相互作用。在三維可變性（3D variability analysis, 3DVA）分析中6,7，包含1047突變位置的區域和iSH2-ABD結構域的區域顯示出比野生型的相應區域更大的靈活性，這與使用1% FDR confidence map分析顯示的額外密度區域較同狀態下野生型明顯減少，即未解析區域靈活性增加（圖2C）的結果一致，為激酶的功能增益（Gain of function）奠定了結構生物學基礎。 圖2. A，H1047R突變體冷凍電鏡中獨特的R1047側鏈構象；B，與野生型和晶體結構對比，ABD-iSH2結構域發生偏移；C，1% FDR confidence map 顯示突變體H1047R（左）和野生型（PDB ID：7MYO）（右）額外密度（紅色區域）的比較。 在突變體E542K和E545K結構中觀察到了相似構象：p85α與p110α解離和ABD結構域均顯示出高度的靈活性（圖3A），這和野生型PI3Kα與磷酸肽相互作用后觀察到的變化非常相似6，表明這兩個突變體既通過阻止p85結合而降低自抑制作用，又極大地增強p110α上ABD結構域的動態靈活性。此外，p110α的催化核心也發生了顯著構象變化，包括C2結構域（殘基330-480）、螺旋結構域和激酶結構域（包括ATP結合位點）在內的部分殘基出現構象重排（圖3B）。E542K的ATP結合位點與E545K幾乎相同，表明存在共同的BYL-719結合模式（圖3C）。不同的是，突變體E542K通過增強nSH2結構域與調節拱（Regulatory arch, 殘基1011-1050）的相互作用來穩定p110α構象，而突變體E545K則表現出一種不同于上述的新構象（圖3D）。 圖3. A，突變體E542K和E545K模型的RMSD示意圖（以Cα測量）；B，突變體E542K、E545K和野生型（PDB ID：7MYO）結構6對比顯示在C2結構域發生部分偏移；C，突變體E542K、E545K與野生型（PDB ID：7MYO）結構6中ATP結合位點的比較；D，突變體E542K（左）和E545K（右）在突變位點周圍的氨基酸殘基構象示意圖。 復旦大學基礎醫學院博士研究生劉曉和青年研究員周慶同為該論文的共同第一作者，復旦大學基礎醫學院王明偉講座教授、美國科學院院士Peter K. Vogt教授和中國科學院上海藥物研究所楊德華研究員為共同通訊作者。該研究先后獲得了國家自然科學基金委員會、國家科學技術部、國家衛生健康委員會、中國科學院‒諾和諾德研究基金和美國國立衛生研究院的經費資助。 據悉，兩位審稿人對該文給予高度評價，認為其突破性地報道了三個熱點突變體較之野生型結構的所有細節信息，是打開PI3Kα藥物發現新篇章的奠基性工作，會被廣泛引用。特別是p110α突變體的高精度結構解析將為設計高效選擇性抑制劑提供關鍵路線圖，是理解p110α致癌突變分子機制的重要線索。 對于這項新突破，復旦大學附屬腫瘤醫院副院長、上海市胰腺腫瘤研究所所長虞先濬博士表示： PIK3CA編碼PIK3α的催化亞基p110α，是一種突變率極高的致癌驅動基因，其中結直腸癌、胃癌、乳腺癌和腦癌中PIK3CA突變率高出25%，與患者較差的預后相關，是最重要的致癌基因之一。超過80%的PIK3CA突變出現在E542K、E545K和H1047R這三個熱點位置上，是治療惡性腫瘤的關鍵靶點。王明偉課題組及其合作團隊首次解析了PIK3α三種致癌突變體復合物的三維結構，為理解PIK3CA突變致癌機理和靶向該激酶突變體設計及篩選特異性抑制劑提供了寶貴的結構基礎，對臨床干預PIK3CA活性和腫瘤精準治療具有重要的意義。 資深藥物化學家、泰勵生物科技有限公司聯合創始人兼總裁仲伯禹博士認為： 起始于PI3K的PI3K-AKT信號通路精準地調控著人體內細胞存活、代謝、生長和增殖等一系列生理功能。PI3K變異或者過表達所導致的過度活化能夠引起抑瘤蛋白PTEN失活和多種癌癥的發生，特別是PI3Kα亞型突變的致癌作用已經廣為人知。然而，野生型PI3Kα關鍵性地調控著細胞的代謝過程，其活性一旦受到抑制，體內血糖和血酯將急劇升高，嚴重時會危及生命。長期以來，由于缺乏PI3Kα野生型和突變型的蛋白結構信息，人們無法選擇性地抑制突變型PI3Kα之活性，而野生型被同時抑制而產生的毒副性嚴重阻礙了相關藥物的研發。 針對近年來PI3K抑制劑頻頻發生的臨床不良事件及吉利德（Gilead Sciences）和因塞特（Incyte）對其已經獲得加速批準后藥物的撤回，數月前美國食品藥品監督管理局（FDA）專門就PI3K抑制劑召開了腫瘤藥物咨詢委員會（ODAC）會議，要求未來的PI3K抑制劑在申請血液腫瘤適應癥時應提供隨機對照試驗的數據支持，從而極大地提高了此類藥物的創新門檻。 王明偉/Vogt/楊德華領銜的合作團隊首次解析了PI3Kα三種致癌突變體復合物的三維結構，不僅為研究PI3K的生理功能和突變致癌機制提供了新的理論基礎，還為設計更安全的選擇性地靶向突變型PI3Kα的新藥分子貢獻了極為有用的工具。長期困擾抗腫瘤藥物研發領域的PI3K亞型選擇性，尤其是α亞型中更具挑戰性的野生型和突變型精準選擇性藥物將會在這項成果的啟發下找到更快捷的解決方案，該工作的重要突破還能幫助研究人員迅速開發出更加安全高效的PI3Kα突變型高選擇性藥物，惠及相關腫瘤病人。 冷凍電鏡作為近年來涌現出來的顛覆性結構生物學方法，在蛋白質結構解析及與配體結合機理研究上發揮著越來越重要的作用。王明偉/楊德華團隊不久前已在2型糖尿病治療領域的胰高血糖素樣肽-1受體（GLP-1R）、葡萄糖依賴性促胰島素釋放多肽受體（GIPR）和/或胰高血糖素受體（GCGR）多重激活機理的探索上獲得了全球領先的進展，最近又在與腫瘤增殖密切相關的PI3K-AKT信號通路研究方面取得突破性斬獲，不僅體現該團隊在選擇解決新藥研發未滿足需求上的卓越洞見和結構生物學功力，也彰顯出他們對先進技術手段的快速掌握能力和高超的資源利用效率。 參考文獻1. 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